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Tipp 28:
Vektorreinigung mit Purification-Kits
Schnell-Kit statt Gel-Ärger

... sagt Michael Hust vom LG Molekulargenetik (Uni Hannover), der im letzten Heft 3/2002 über unkonventionelle Proteingel-Entfärbung informierte. Dieses Mal geht's um erfolgreiches Klonieren:


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Erinnern Sie das letzte Mal, als Sie nach einer gewissen Probe in einem dieser ULT-Gefrierschränke suchten? mehr


"Ich hatte lange Zeit Probleme mit Ligationen, bei denen der geschnittene Vektor über das Gel aufgereinigt (Gel-Lauf, dann die Banden ausgeschnitten und die DNA aus dem Gel eluiert) wurde, kurz: Es klappte gar nicht. Seitdem schneide ich den Vektor und das PCR-Produkt und reinige beide mit einem PCR-Purification Kit (beispielsweise dem Invitek Invisorb PCRapid Purification Kit) auf, mit welchem man normalerweise Primerdimere, Oligos oder dNTPs entfernt.

Dies funktioniert dann sehr gut, wenn das aus dem Plasmid herausgeschnitte Fragment kleiner als 75 bp ist. Die kleineren Fragmente werden weggewaschen und können nicht bei der Ligation wieder eingebaut werden, gleichzeitig werden auch die Enzyme und die Salze des Puffers entfernt.

Wenn das Fragment größer ist, habe ich auch schon mehre Restriktionsendonnukleasen, die im Fragment schneide eingesetzt, um das Fragment in Fragmente zu zerlegen. Wie gesagt: Diese Methode funktioniert bei mir sehr gut!"
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Letzte Änderungen: 08.09.2004


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