Tipp 23:
Isoelektrische Fokussierung -
Weg mit dem Öl

Andreas Maier, Botanisches Institut der Universität Tübingen/Physiologische Pflanzenökologie

Detektieren & Sequenzieren mit NEB!

Einfache Protokolle, hoher Durchsatz, schnelle Prozesse: Wie Sie Ihre SARS-CoV-2 Forschung optimieren mehr

"Bei der isoelektrischen Fokussierung (IEF) in immobilisierten pH-Gradienten kommen sogenannte IPG-Strips zur Verwendung. Um diese Gelstreifen während der Fokussierung vor dem Austrocknen beziehungsweise dem Auskristallisieren des Harnstoffs zu schützen, werden sie in der Regel mit Mineralöl überdeckt. Genau dieses stört aber die nachfolgende Beladung der Polypeptide mit Dodecylsulfat. Der Standard-Äquilibrierungspuffer enthält zwar 2 % SDS, ein Großteil davon verschwindet allerdings in besagtem Öl. Restlos entfernen lässt sich. dieses nicht mehr.

Seine Menge kann aber deutlich reduziert werden, wenn die Streifen vor dem Äquilibrieren auf saugfähigem Zellstoff oder ähnlichem ausgelegt werden (mit der Gelseite nach oben!). Diese einfache Prozedur erlaubt ein Verkürzen der Äquilibrierung und verbessert meiner Erfahrung nach auch das Ergebnis."