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Blot

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Artikel: Fast kein Western Blot kommt ohne Milch oder BSA aus. Setzt man die beiden in der richtigen Reihenfolge ein, beeindruckt das Ergebnis nicht nur Journal-Editoren.... mehr

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Trick: Eine Plexiglas-Ablage wird zur Schneidschablone für Western Blot-Filterpapiere.... mehr

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Zuverlässige -80°C in Gefrierschränken werden mittels luft- oder wassergekühlter Kompressoren erzeugt. mehr

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Artikel: Der schottische Softdrink Irn Bru vertreibt nicht nur den Kater nach einer ausgiebi­gen Whiskey-Verkostung. Er ist auch für die Färbung von Western-Blots geeignet.... mehr

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Produkt: ReadyTector® ist die all-in-one De­tek­tions­lösung für Western Blots. Sie er­mög­licht eine schnelle Einschritt-Immundetektion ohne Hintergrund.... mehr

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Produkt: Ja, es gibt ihn. Den analog zum Zielprotein visualisierbaren Proteinmarker. Ein Muss für den perfekten Western Blot!... mehr

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Informieren und Vernetzen Sie sich zum Thema analytische Flüs­sig­keits­chro­mato­grafie. Teilnahme kostenfrei mehr

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Produkt: Proteintech bietet Antikörper gegen eine Vielzahl von Ladekontroll-Proteinen an, also gegen konstitutiv exprimierte Proteine, deren Expression sich während des Expriments nicht verändert. ... mehr

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Produktübersicht: In den letzten Jahren wurden neue Western Blot-Verfahren entwickelt, wie zum Beispiel Kapillarelektrophorese-basierte Blots sowie mikrofluidische Western Blots. Aus der Kombination des klassischen Western Blots mit Bead-basierten Immunoassays entstand die DigiWest-Technik. ... mehr

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Trick: Schützen Sie Ihre Western Blots vor Licht aus Halogenlampen. Halogenlicht inaktiviert Antikörper. Resultat sind blanke Membranen.... mehr

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Methode: Western Blots mit kurzen DNA-Fragmenten, die hundertmal günstiger sind als Antikörper.... mehr

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Produktübersicht: Wie Southern- und Northern Blot kann man auch den Western Blot ganz ohne Strom und elektrisches Feld durchführen. Legt man einen Filterpapierstapel... mehr

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Methode: Mit dem „Fast Semi-Dry WesternBlot“ lässt sich die Blotdauer bei Western Blots auf 12 min verkürzen. Wir zeigen, wie Sie damit auch noch Geld sparen.... mehr

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Trick: Wenn Antikörper nach dem Western-Blot das Protein nicht mehr rausrücken, hilft Ihnen vielleicht dieser Stripping-Puffer... mehr

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Trick: Banden auf einem Western-Blot kommen besser heraus, wenn man die Membran trocknet. Pusten, oder fönen, dann schnell fotografieren.... mehr

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Trick: Nicht geklappt hat dieser Unblot-Versuch, obwohl er sich genau an das Rezept hielt.... mehr

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Trick: Wieviel Gesamtprotein muss man auf ein SDS-Gel auftragen um im Western-Blot eine sichtbare Bande zu erhalten? ... mehr

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Trick: Wer nicht für jeden Antikörper neu blotten will, der strippt“ seine Western Blots. Hier eine einfache Methode. ... mehr

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Trick: Damit die Unblot-Methode funktioniert sollte kein SDS im Gel, die Glasplatten silanisiert sein und die Antikörperkonzentration hoch.... mehr

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Trick: Beim Westernblot kann man mit Slim Fast überflüssige Banden blocken, das enthält jede Menge Sojaprotein und riecht auch noch schokoladig.... mehr

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Artikel: Die meisten Protokolle für die Western Blot-Färbung mit Ponceau S schreiben eine 0,1-prozentige Lösung vor. Das ist hundert mal so viel als tatsächlich nötig.... mehr

Elektrophorese

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Trick: Mithilfe einer Plastikbox für Wattestäbchen kann man einen sehr effektiven Gel-Gießstand herstellen, mit man bis zu 15 PAGE-Gele parallel gießen kann.... mehr

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Trick: Gemeinsames Trennen hoch- und niedermolekularer Proteine im 7,5%igem Trenngel mit 20 minütigem Elektrophorese-Vorlauf. ... mehr

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Methode: Ein cleverer Trick beschleunigt die Trennung von Isoproteinen mittels 2D-Gelelektrophorese und Westernblot – und verbessert die Qualität... mehr

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Trick: Färbung der Banden im SDS-PAGE-Gel mit Direkt Rot oder Amido Schwarz ist schneller, als mit Coomassie. In 10 Minuten fertig.... mehr

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Trick: Die Kolloidale Coomassie-Färbung ist ähnlich sensitiv wie eine Silberfärbung. Ohne Methanol. Nachweisgrenze bei 1-2 Nanogramm Protein/Bande.... mehr

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Trick: Proteinbanden mit Coomassie, aber ohne Methanol, Ethanol und Essigsäure färben und entfärben. Eine gesundheitlich unbedenkliche Methode.... mehr

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Trick: Hier ist es, nebst einer kleinen Fachdiskussion über den Zugang zu alten Originalveröffentlichungen: das original Laemmli-Rezept... mehr

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Trick: Hier fragte ein Leser nach der original Laemmli-Rezeptur. In Artikel 104 wurde dem Leser dann geholfen.... mehr

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Methode: Epicoccum nigrum produziert eine Substanz, mit der sich SDS-Gele und Blots färben lassen.... mehr

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Methode: Einige Alternativen zur klassischen Silberfärbung von Gelen werden vorgestellt, die sogar Massenspektrometrie- und Edman-Sequenzierungs-verträglich sind.... mehr

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Trick: Mischen von Proben mit Ladepuffer: Billiger ist als Parafilm, handlicher als eine Multi-Platte und dabei auch noch wie­der­ver­wend­bar - die Wägeschale... mehr

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Trick: 100%iger Alkohol eliminiert Luftbläschen aus Polyamid-Gelen, Nach dem Polymerisieren kann man den Alkohol einfach abgießen... mehr

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Trick: Das Gel wird in der Coomassie-Lösing in der Mikrowelle erhitzt. Anschließend wird es ebenfalls in dier Mikrowelle entfärbt. Zeitersparnis. ... mehr

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Trick: Luftgetrocknete Polyacrylamidgele können Sie wieder rehydrieren und so weiterbehandeln als wären sie neu. Viele Tipps zu getrockneten Gelen.... mehr

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Methode: Eine hartnäckige IEF-Legende wird widerlegt: Die Denaturierung der Proben mit 8M Harnstoff führt nicht zu Deamidierung oder Carbamylierung. ... mehr

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Methode: Raffinierte Kniffe, mit denen die 2D-Elektrophorese noch mehr Kleckse liefert – auch von seltenen Proteinen und bei ungünstigen Bedingungen. ... mehr

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Trick: Ein gelöchertes Stück Plexiglas mit Stiel hält die Polyacrylamid-Gele in der Färbe/Entfärbewanne fest und verhindert so das zerfleddern der Gele.... mehr

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Trick: Mineralöl auf den Gelstreifen schützt vor Austrocknen Auskristallisieren von Harnstoff, stört aber die Beladung der Polypeptide mit Dodecylsulfat.... mehr

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Methode: IEF mit immobilisierten Ampholyten sind ein Wendepunkt" in der Proteom-Analyse... mehr

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Methode: die Perfektionierung der isoelektrischen Fokussierung (IEF) in klassischen Freiflußelektrophorese-Geräten... mehr

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Trick: Ein Stück Weichschaumstoff in der Entfärbewanne beschleunigt die Befreiung des Gels vom Coomassie-Farbstoff... mehr

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Trick: Ein gefaltetes Papierhandtuch in der Entfärbewanne beschleunigt die Befreiung des Gels vom Coomassie-Farbstoff... mehr

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Trick: Proteinbanden mit Coomassie, aber ohne Methanol. Färben mit Isopropanol und Essigsäure. Zum Entfärben nur 10% Essigsäure.... mehr

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Trick: Wird ein Coomassie-gefärbtes, SDS-Gel geblottet, wird der ungebundene Farbstoff eluiert, gefärbte Proteine bleiben im Gel.... mehr

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Trick: Lufttrocknen Sie Ihr Acrylamid-Gel zwischen Zellophanfopien. Sparen Sie sich Vakuum-Pumpe, Kühlfalle und Trocken-Apparatur.... mehr

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Trick: Für die zweite Dimension der 2D-Gelelektrophorese kann man beim Anodenpuffer das Glycin weglassen – ohne Qualitätsverluste.... mehr

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Trick: Sie können den Durchsatz bei der 2D-Gelelektrophorese mit Notched Inner Plates verdoppeln. Das können Sie auch selber bauen.... mehr

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Trick: Entfärbt man ein Coomassie-Gel mittels Westernblot, besteht die Gefahr dass dabei Banden verschwinden. Hier die Methodik des Blottens.... mehr

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Trick: Durch Schläuche fließt Wasser in mehreren Wendeln durch einen eisgefüllten Styroporblock. Kühlflüssigkeit für die 2D-Gelelektrophorese.... mehr

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Methode: Bei der Auftrennung integraler Membranproteine in 2D-Gelen gehen mit dem Solubilisierungsmittel OBAS wesentlich mehr Proteine in Lösung.... mehr

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Trick: Gel-Taschen reißen nicht so schnell, wenn Sie den Gel-Kamm nach dem Putzen mit Silikonpaste einreiben. Dann gleitet er leicht aus dem Gel.... mehr

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Trick: Das Gel wird in der Coomassie-Lösing in der Mikrowelle erhitzt. Anschließend wird es ebenfalls in dier Mikrowelle entfärbt. Zeitersparnis. ... mehr

Extraktion

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Produktübersicht: Die meisten Labore verwenden für die Affinitätsreinigung von Proteinen das Ni2+-His-Tag-System. Neue Affinitäts-Systeme wie zum Beispiel CE7/IM7 sind jedoch effektiver und schneller. ... mehr

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Produktübersicht: Für die schnelle Extraktion von Proteinen aus Zelllysaten bieten Hersteller verschiedene Kits an. Die meisten nutzen Detergenzien für die Proteinextraktion.... mehr

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Trick: Die Löslichkeit des Protein-Pellets bei der GTPC-Methode wird durch den Einsatz eines Methanol-Chloroform-Wasser-Gemisches stark verbessert.... mehr

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Trick: Bei der FASP filtriert man Proteine. Auf der Ultrafiltrationsmembran werden sie dann zu Peptiden verdaut, die die Membran passieren können.... mehr

Geld sparen

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Trick: Einfach Plastikteile, wie Spacer nachzukaufen ist teuer. Hier gibt’s einen ebenso einfachen, wie bewährten Trick sich die kleinen Teile selber zu gießen... mehr

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Trick: Geld und Materialsparen durch Portionierung und Teilung von großen Gelen und die Verwendung von Minigelen. Sparsamkeit im Labor.... mehr

Isolieren

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Trick: Proteine unterschiedlicher Größe können im Stufengel sauber getrennt werde. Das ist einfacher und billiger als ein Gradientengel.... mehr

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Methode: Die verbesserte Auftrennung minimiert Proteinverluste und erhält die Struktur der Proteine. ... mehr

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Trick: Bei der TAP kann Fractogel EMD eine Alternative zu Sepharose-IgG-Beads sein. Es ist billiger und funktioniert bei manchen Proteinen besser.... mehr

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Methode: Neue Methoden zur Trennung von Membranproteinen von löslichen Proteinen.... mehr

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Methode: Zur Isolierung von Plasmamembranen stellen Sie ein Zweiphasensystem aus Dextran und PEG her.... mehr

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Trick: Mit Ausschneiden, Dialyse und Elektroelution lassen sich Proteine aus PAGE-Banden extrahieren und anschließend weiterverwenden.... mehr

Molekularbiologie

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Artikel: Chemische Proteinsynthese-Inhibitoren sind alles andere als spezifisch. Viel genauer und reversibel arbeitet ein genetisch codierter Inhibitor.... mehr

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Artikel: Ein universeller Epitop-tag, der für sämt­liche Anwendungen gleich gut geeignet ist, wäre ein echter Knüller. Und es gibt ihn tatsächlich.... mehr

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Methode: Mit der Trim-Away-Methode kann man ausgesuchte Proteine markieren und ihren schnellen Abbau durch das Proteasom einleiten.... mehr

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Methode: Die zellfreie Proteinsynthese kann man ohne Klonierungen und Transformationen durchführen.... mehr

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Artikel: Für ein optimiertes Verfahren zur zellfreien Proteinsynthese schmeißt man alle Zutaten in einen Pott. Das geht einfach und ist günstig.... mehr

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Artikel: Mit der Kombination von GFP-Antikörpern und Degron-Systemen für die Proteolyse lassen sich gezielt Proteine in Zebra­fischen deaktivieren.... mehr

Problemlösungen

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Artikel: Split-Inteine sind ziemlich ungewöhnliche Proteine. Biologen können sie aber für das Labeln von Proteinen einsetzen.... mehr

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Artikel: Mit einem künstlichen Vesikelsystem schaffen es Bakterien, auch voluminöse, hydrophobe Molekül-Brocken aus ihrem Inneren herauszuschleusen.... mehr

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Trick: Das Bewegen von winzigen Proteinkristallen wird durch SSAW mittels stehenden akustischen Wellen präzise, kristallschonend und sicher.... mehr

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Trick: Bei eine TBS-Stammlösung mit diesem Rezept hergestelt, muss man anschließend nicht mehr den pH einstellen. Der ist dann schon 7,5.... mehr

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Methode: Proteine adsorbieren unterschiedlich stark an Oberflächen, was zu unerwünschten und unkalkulierbaren Probenverlusten führt.... mehr

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Methode: Partikel-basierte Peptidsynthese anschaulich erklärt.... mehr

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Methode: Wenn Proteine denaturiert sind, kann ein Wiederbelebungsversuch mit der Renaturierungshilfe b-Cyclodextrin helfen.... mehr

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Methode: Membranproteine sind wählerisch wenn es darum geht, sie in Lösung zu bringen... mehr

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Methode: Das zentrale Problem beim Mikrosequenzieren sind blockierte N-terminale Enden... mehr

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Methode: Kleine Tricks für altbewährte Labormethoden (SDS-Gelelektrophorese, ELISA, FISH).... mehr

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Methode: Wie bekommt man in der Proteom­for­schung wirklich alle Proteine in Lösung? Vermeintlich „ideale Solu­bili­sierungs­bedin­gun­gen“ werden geprüft und bewertet.... mehr

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Artikel: Ein britisches Team entwickelte eine Wirkstoff-Screening-Strategie, bei der Membranproteine in kleinen Fettkugeln rekonstituiert werden, die wie winzige Raffaello-Pralinen aufgebaut sind.... mehr

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Artikel: Die Coomassie-Färbung von Protein-Banden ist zeitaufwendig und das verwendete Methanol giftig. Schneller und gesundheitsschonender geht es mit der elektrophoretischen Variante.... mehr

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Artikel: Fluoreszenz-Proteine bleichen unter dem Mikroskop ziemlich schnell aus. Bündelt man sie zu einem Array-Tag, halten sie wesentlich länger durch. ... mehr

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Artikel: Für die Aufreinigung werden Proteine meist mit kurzen Peptid-Tags versehen. Mit einem zusätzlichen SNAC-Tag kann man sie problemlos wieder entfernen.... mehr

Proteinanalytik

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Trick: Mit den gängigen mas­sen­spek­tro­me­tri­schen Analyseverfahren für Phos­pho­pro­te­ine kann man zwar Phos­pho­ry­lie­rungs­stel­len identifizieren.... mehr

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Methode: Die Analyse-Ergebnisse der Massenspektrometrie-basierten Proteomik hängen sehr stark von der richtigen Probenvorbereitung ab. Die Protokolle müssen jeweils an die Art der Proben angepasst werden.... mehr

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Methode: Mit der Ultra-swollen lipidic mesophas-Kristallisation gelingt auch die Kristallisation von Membranproteinen mit erhöhten Anteilen hydrophiler Domänen.... mehr

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Trick: Dieser modifizierte Bradford-Assay ist deutlich empfindlicher als kommerzielle Kits. Entscheidend ist die Einstellung des pH-Wertes... mehr

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Methode: Für Biologen ist die Raman-Spektroskopie interessant, weil sie schnell und nicht-invasiv ist.... mehr

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Trick: Einfacher und Zuverlässiger Test der Succinat-Dehydrogenase-Aktivität, dem membranständigen Bindeglied zwischen Zitratzyklus und Atmungskette.... mehr

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Trick: Gel Shift Oligos preiswert labeln mit einem dritten Oligo. An ein überhängendes 3´Ende wird ein gelabeltes universelles Oligo gehängt. Gut und billig.... mehr

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Trick: Mit dem infrarot fluoreszierenden Reporter-Protein kann man das Molekulargewicht des IFP-Fusionsproteins im denaturierenden Proteingel ermitteln.... mehr

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Methode: Wie kann man zellwandabbauende Enzyme bei der Arbeit beobachten.... mehr

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Methode: Righettis Methode der Hexapeptid-Egalisierung gründet auf der Idee, dass jedes Protein an irgendetwas bindet.... mehr

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Methode: Neue Erkenntnisse zum Lowry-Test und zur Plasmid-Präparation. ... mehr

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Trick: Molekulargewichtsbestimmung von Membrabprotein-Komplexen durch Ana­ly­ti­sche Ultrazentrifugation. Die Gly­co­sy­lierung der Proteine... mehr

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Methode: Mit diesen Tests lassen sowohl die freien SH-Gruppen als auch die Gesamtzahl der Cysteinreste eine Proteins bestimmen... mehr

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Trick: Eine Software hat Turbulenzen in einem 2D-Gel entdeckt, die sonst keiner sieht. Ansonsten soll „Proteomweaver“ aber ganz ordentlich arbeiten.... mehr

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Trick: Ein selbstgemachtes ECL-Detektionsreagenz ist billiger und zeigt auch noch weniger unspezifische Banden als ein gekauftes.... mehr

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Trick: Welches Molekulargewicht hatte eigentlich das bisher größte Protein, welches in einem Fremdorganismus exprimiert wurde?... mehr

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Trick: 1. Faustregel zur Berechnung Rauminhalte eines Proteins und 2. Kostenlose Software zum Finden von Protease-Schnittstelen.... mehr

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Trick: Peptidkonzentration messen: BCA-Assay, Bradford, Silberfärbung und Ex­tink­tions­messung bei 214 nm können Alternativen zu 280 nm sein.... mehr

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Trick: Vergleichbarkeit von silbergefärbten Banden bei der zweidimensionalen Elektrophorese: zwei äquilibrierte Streifengele mitlaufen lassen.... mehr

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Trick: Mittels einer Eichreihe mit BSA und Amidoschwarz können Sie mit 1 Mikroliter Proteinextrakt eine Grobbestimmung der Konzentration bekommen.... mehr

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Artikel: Eine neue Methode misst die Masse kleiner Biomoleküle anhand der Lichtstreuung. Damit kann man sowohl Proteine detektieren als auch die Interaktion von Wirkstoffen mit Proteinen analysieren.... mehr

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Artikel: Kristallviolett wird meist für die Gram­färbung von Bakterien eingesetzt, ist aber auch eine Alternative zur Coomassie-Färbung von Proteinen in SDS-PAGE-Gelen.... mehr

Signale

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Methode: Proteinsynthese und gleichzeitige Fixierung direkt auf dem Microarray. So kann man durch Zugabe zu testender Interaktionspartner etwas über mögliche... mehr

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Methode: Inteine schneiden sich selbst aus Vorläufer-Proteinen heraus. Forscher nutzen dies zur Proteinreinigung und Analyse von Protein-Protein-Interaktionen.... mehr

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Methode: FRET-Systeme dienen als molekulare Lineale, um Entfernungen zwischen Biomolekülen zu messen. Erfahren Sie, wie's funktioniert.... mehr

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Methode: Mit Fluoreszenzfarbstoffen kann man Entfernungen zwischen Biomolekülen messen und molekulare Wechselwirkungen in Echtzeit verfolgen.... mehr

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Methode: Die geschilderte Caged-cAMP-Methode macht intrazelluläre Signalwege in vivo sichtbar. Mit Licht-Impulsen wird dabei die Membranleitfähigkeit gemessen.... mehr

Strukturanalyse

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Methode: Das EF-X-Verfahren macht Konformationsänderungen und Bewegungen innerhalb von Proteinen sichtbar... mehr

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Artikel: Neu erarbeitete Kriterien für die Einzel­molekül-FRET ermöglichen präzise und miteinander vergleichbare Abstands­messungen. Beste Voraussetzungen für eine verlässliche Strukturanalyse.... mehr

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